免疫組化服務是病理學與生命科學研究中重要的技術手段，通過抗原-抗體特異性結合，在組織原位對目標蛋白進行定性、定位和半定量分析。一套完整的免疫組化服務流程，可拆解為樣本處理、切片制備、染色操作和結果判讀四大環節。
一、樣本固定與包埋
組織離體后需立即浸入10%中性福爾馬林固定液，固定時間通常為6-24小時。固定不足會導致抗原彌散，過度固定則可能遮蔽抗原表位。固定完成后，經梯度酒精脫水、二甲苯透明、石蠟浸透，最終包埋成組織蠟塊。這一步決定了后續切片的支撐質量。
二、切片與撈片
使用輪轉式切片機將蠟塊切成3-5μm厚度的薄片。切片需完整、無皺褶、無刀痕。切下的蠟帶在40℃溫水中展平，用防脫玻片撈起后，于60℃烘片過夜，使組織牢固貼附。對于鈣化組織或冰凍組織，需分別采用脫鈣處理或冰凍切片機進行特殊處理。
三、脫蠟、水化與抗原修復
染色前，切片經二甲苯脫蠟、梯度酒精復水，恢復組織親水狀態。隨后進行抗原修復——這是影響染色成敗的關鍵。常用方法包括熱修復（檸檬酸緩沖液或EDTA緩沖液，高壓或微波加熱）和酶修復（胰蛋白酶或胃蛋白酶）。修復可使交聯的抗原決定簇重新暴露。
四、染色流程
1.內源性過氧化物酶封閉：3%H?O?孵育10-15分鐘，消除背景干擾。
2.封閉：血清或BSA封閉非特異性結合位點。
3.一抗孵育：4℃過夜或室溫1-2小時，抗體需經預實驗確定最佳稀釋度。
4.二抗孵育：對應種屬的標記二抗，室溫30分鐘。
5.顯色：DAB或AEC底物顯色，鏡下控制反應時間，陽性信號呈棕色或紅色。
6.復染：蘇木素染細胞核，藍化后封片。
每步之間均需充分洗滌（PBS或TBS，含吐溫）。
五、結果判讀與評分
評分采用半定量方法，綜合染色強度與陽性細胞比例：
-染色強度：0分（陰性）、1分（弱）、2分（中）、3分（強）
-陽性比例：0分（<5%）、1分（5-25%）、2分（26-50%）、3分（51-75%）、4分（>75%）
總分為強度×比例（0-12分），或兩者相加（0-7分）。特定指標（如ER、PR、HER2）需參照ASCO/CAP指南進行專用評分系統。質控設置包括陽性對照、陰性對照及同型對照，以確保結果可靠。
從一張白片到可量化的染色評分，每一環節都依賴嚴格的操作規范與經驗積累。規范化的免疫組化服務，為病理診斷和生物標志物研究提供了堅實的可視化證據。
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