1：雙熒光素酶報(bào)告基因適反應(yīng)溫度？

　　A：室溫（20-22℃）。反應(yīng)時(shí)各個(gè)組分（細(xì)胞裂解產(chǎn)物，底物工作液等）都需要調(diào)整到室溫。此兩種熒光素酶的反應(yīng)速率是受溫度影響的，為了保證實(shí)驗(yàn)的一致性，我們推薦此兩種工作液在檢測(cè)時(shí)都孵育至室溫。

　　2：雙熒光素酶報(bào)告基因載體該如何選擇？

　　A：1）螢火蟲(chóng)熒光素酶建議選取pGL-3或pGL-4或者自己構(gòu)建的載體

　　2）海腎熒光素酶建議選取phRL-TK或pGL-4載體或者自己構(gòu)建相應(yīng)的載體。建議海腎載體不使用強(qiáng)啟動(dòng)子（如SV40、CMV），而選用中等強(qiáng)度的啟動(dòng)子（如TK）。

　　3：檢測(cè)的熒光數(shù)值很低怎么辦？

　　A：檢測(cè)的熒光數(shù)值很低說(shuō)明細(xì)胞裂解液中的熒光素酶含量很低。通常解決辦法為

　　1）轉(zhuǎn)染的質(zhì)粒采用細(xì)胞轉(zhuǎn)染級(jí)別的質(zhì)粒抽提試劑盒抽提。

　　2）優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件，盡可能的提高轉(zhuǎn)染效率。

　　3）增加實(shí)驗(yàn)的細(xì)胞量，并且裂解細(xì)胞時(shí)，適當(dāng)減少細(xì)胞裂解液的量。

　　4：進(jìn)行檢測(cè)的過(guò)程中，熒光信號(hào)值太高該如何進(jìn)行調(diào)整？

　　A：1）在轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)后，減少細(xì)胞的孵育時(shí)間。

　　2）降低熒光信號(hào)采集時(shí)間。

　　3）進(jìn)行樣品的稀釋。

　　5：螢火蟲(chóng)熒光素酶讀值和海腎熒光素酶讀值的比例多少時(shí)比較合適？

　　A：盡量保證對(duì)照組的螢火蟲(chóng)熒光素酶的讀值和海腎熒光素酶的讀值接近，或者海腎熒光素酶的讀值比螢火蟲(chóng)熒光素酶的讀值稍高。對(duì)于具體的實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，由于螢火蟲(chóng)熒光素酶質(zhì)粒和海腎熒光素酶的質(zhì)粒抽提的質(zhì)量不一致，待檢測(cè)目的調(diào)控元件的調(diào)控能力的不同等原因，一次實(shí)驗(yàn)很難達(dá)到一個(gè)比較好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，因此對(duì)于此實(shí)驗(yàn)，我們推薦預(yù)實(shí)驗(yàn)優(yōu)化螢火蟲(chóng)熒光素酶質(zhì)粒和海腎熒光素酶質(zhì)粒的共轉(zhuǎn)染量。